Гепатит С (Hepatitis С Virus)
качественное и количественное определение РНК, определение генотипа вируса
(информация для специалистов)
Гепатит С представляет собой заболевание, вызываемое РНК-содержащим вирусом гепатита С, относящимся к семейству Flaviviridae. Структура вируса неоднородна и выделяют 6 генотипов и множество субтипов вируса гепатита С. При этом течение заболевания и соответственно эффективность противовирусной терапии отличаются в зависимости от генотипа.
Размножение вируса происходит в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах, макрофагах и В-лимфоцитах). Среди заболеваний, которые способен вызвать вирус гепатита С, так же присутствуют криоглобулинемия, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания.
Вирус гепатита С обладает высокой мутационной активностью, что позволяет ему избегать защитного воздействия иммунных клеток. Часто инфицирование Hepatitis С Virus протекает бессимптомно.
Передача возбудителя осуществляется от больного человека или носителя с кровью. В частности, при переливании элементов крови и плазмы, пересадке органов, при использовании нестерильных шприцев, игл, инструментов для пирсинга и татуирования. Вертикальный путь передачи вируса от инфицированной матери ребенку во время беременности и родов и половой путь возможны, но встречаются крайне редко.
Инкубационный период в случае заражения составляет от 4 недель до 6 месяцев. После этого лишь у 15% заразившихся развивается клиническая картина острого гепатита. В остальных случаях течение болезни бессимптомное, а обнаруживаться вирус может лишь при случайном обследовании.
Клиническими симптомами острого вирусного гепатита являются:
- тошнота,
- ломота в теле,
- отсутствие аппетита и потеря веса,
- редко желтушность кожных покровов.
Для вирусного гепатита С характерна хронизация процесса (в 15 раз превышает частоту хронизации при вирусном гепатите В). При этом будут наблюдаться изменения в лабораторных анализах (нарушения функции печени) и скудные симптомы. Заболевание может привести к развитию печеночной недостаточности, циррозу печени и гепатоцеллюлярной карциноме.
Для диагностики вирусного гепатита С используются серологические методы и метод полимеразной цепной реакции. При этом выявление РНК вируса говорит о размножении его в организме. ПЦР обладает рядом преимуществ:
- 100% специфичность и чувствительность.
- Возможность выявления вируса гепатита С уже через 10-12 дней после инфицирования у лиц с высоким риском заражения (раньше, чем в крови появится антитела и произойдут изменения в показателях работы печени).
- Возможность качественной и количественной оценки.
Суть метода:
Суть метода полимеразной цепной реакции заключается во множественном удвоении РНК, имеющихся в образце, с помощь ферментов РНК-полимераз. В результате чего образуется большое количество искомых РНК, которые можно уловить с помощью флуоресцентного красителя. При этом возможно получить качественный (есть или нет инфицирование вирусом) и количественный (сколько конкретно РНК вируса обнаружено) результаты. Количественная оценка РНК вируса гепатита С крайне важна для определения эффективности проводимой терапии. Кроме того, необходимо провести генотипирование вируса гепатита С для подбора адекватной терапии и оценки прогноза заболевания. Это также осуществляется с помощью ПЦР-диагностики.
Показания для проведения исследования:
- При подозрении на инфицирование вирусом гепатита С: категория лиц из группы риска (медицинские работники, пациенты, находящиеся на гемодиализе, инъекционные наркоманы, дети, рожденные от инфицированных матерей).
- При сомнительных результатах серологического обследования.
- При микст-гепатитах (гепатит С часто сопровождается у инъекционных наркоманов гепатитом В).
- При симптомах гепатита и повышении биохимических показателей работы печени.
- Во время проведения противовирусной терапии для контроля за эффективностью (до лечения, в конце лечения, через 6 и 24 месяца после окончания лечения).
- При планировании и во время беременности.
Подготовка пациента к исследованию:
Особой подготовки не требуется.
Референсные значения:
В норме РНК вируса гепатита С в образце не обнаруживается. Результат отрицательный.
Интерпретация результатов:
Положительный результат говорит об обнаружении РНК Hepatitis С Virus и об инфицировании вирусом гепатита С.
Количественная оценка РНК вируса гепатита С:
Количество РНК вируса |
Значение |
Уровень вируса не определяется (менее 750 копий/мл) |
Отсутствие вируса в крови или его минимальное значение. |
< 2×106 копий/мл (8×105 МЕ/мл) |
Низкая виремия (благоприятный прогноз заболевания и эффективности терапии). |
> 2×106 копий/мл (8×105 МЕ/мл) |
Высокая виремия (неблагоприятный прогноз течения заболевания и эффективности терапии). |
Результаты генотипирования вируса гепатита С:
Генотип |
Значение |
Генотипы 1а, 1b |
Очень высокий риск хронизации процесса, возможность развития осложнений. Лечение осуществляется большими дозами интерферона. Продолжительность лечения 48 недель. |
Генотипы 2, 3a/3b |
Хорошо поддаются лечению. Продолжительность лечения 24 недели |
Вирус не типируется |
Другой генотип (не 1а, 1b, 2, 3a/3b) |
Возможные влияния на результат:
Ложноотрицательный |
Ложноположительный |
Минимальная вирусная нагрузка крови (менее 750 копий/мл) |
Ошибка при обработке материала в лаборатории (попадание посторонних молекул РНК в пробу). |
Проведение на фоне взятия материала противовирусной терапии. |
|
Наличие в образце ингибиторов – химических и белковых субстанций, влияющих на различные компоненты ПЦР. |
|
Обнаружение в крови гепарина. |
|
Высокий уровень криоглобулинов в крови. |
|
Для точной постановки диагноза при обнаружении РНК вируса гепатита С в пробе в случае отсутствия изменений других лабораторных показателей необходимо проведение повторной ПЦР-диагностики и комплексная оценка результатов. Это связано с тем, что концентрация вируса в крови во время заболевания меняется волнообразно. Самым достоверным в случае чередования отрицательных и положительных результатов ПЦР-диагностики будет биопсия печени.