Дифференциация возбудителей коклюша (Bordetella pertusis), паракоклюша (Bordetella parapertusis) и бронхисептикоза (Bordetella bronchiseptica)
качественное определение ДНК
(информация для специалистов)
Исследование, производимое с помощью полимеразной цепной реакции, позволяет определить ДНК возбудителей коклюша, паракоклюша и бронхисептикоза и правильно поставить диагноз.
Bordetella pertusis/parapertusis/bronchoseptica представляют собой грамотрицательные коккобациллы, относящиеся к роду Bordetella. Они способны поражать эпителий дыхательных путей и вызывать высококонтагиозные заболевания (коклюш/паракоклюш/бронхисептикоз). Бронхисептикоз при этом развивается у человека крайне редко и чаще поражает кошек и домашних кроликов, от которых происходит заражение людей.
Источником инфекции является больной человек или животное (в случае бронхисептикоза). Возбудитель инфекции передается воздушно-капельным путем.
Инкубационный период длится от нескольких дней до 3 недель. Далее развивается катаральная стадия, сопровождающаяся признаками простуды: лихорадка, насморк, слабость, слезотечение, заложенность носа. Продолжительность этой стадии – около 2 недель.
После этого в клинической картине заболевания появляется тяжелый приступообразный кашель, вплоть до рвоты и цианоза кожи лица. Его появление характеризует развитие пароксизмальной стадии, которая продолжается от 1-2 недель до нескольких месяцев.
При выздоровлении происходит постепенное уменьшение количества приступов кашля вплоть до их исчезновения.
Крайне тяжело заболевание протекает у детей. Часто может приводить к развитию осложнений:
- пневмония,
- энцефалит,
- судороги,
- летальный исход.
Для дифференциальной диагностики коклюша, паракоклюша и бронхисептикоза используются микробиологические, серологические методы, а также метод полимеразной цепной реакции в реальном времени, который обладает высокой специфичностью, чувствительностью и способностью определять возбудителя даже на фоне приема антибиотиков. Необходимо отметить, что самые точные результаты ПЦР получаются при взятии материала для исследования в катаральную стадию заболевания и в начале пароксизмальной стадии (около 4 недель после появления первых симптомов). Далее чувствительность ПЦР несколько снижается, и для получения достоверного результата необходимо дополнительно проведение серологических реакций. Особенно чувствителен данный метод диагностики у младенцев до 1 года.
Суть метода:
Суть метода полимеразной цепной реакции в реальном времени заключается во множественном удвоении ДНК, имеющихся в образце, с помощь ДНК-полимераз. В результате чего образуется большое количество искомых ДНК, которые можно уловить с помощью флуоресцентного красителя.
Показания для проведения исследования:
- При подозрении на коклюш/паракоклюш/бронхисептикоз.
- При контакте с инфицированным коклюшем/паракоклюшем/бронхисептикозом. Особенно при наличии у обследуемого признаков простуды.
Подготовка пациента к проведению исследования:
- За 2-3 часа до взятия мазка из носоглотки, зева не рекомендуется принимать пищу, чистую негазированную воду пить можно.
Референсные значения:
В норме ДНК Bordetella pertusis/parapertusis/bronchoseptica в образце не обнаруживается. Результат отрицательный.
Интерпретация результатов:
Положительный результат говорит об обнаружении ДНК возбудителя коклюша/паракоклюша/бронхисептикоза и об инфицировании Bordetella pertusis/parapertusis/bronchoseptica.
Возможные влияния на результат:
Ложноотрицательный |
Ложноположительный |
Некачественное взятие материала (мало материала) |
Ошибка при обработке материала в лаборатории (загрязнение пробы чужеродными молекулами ДНК). |
Взятие материала в конце пароксизмальной стадии или на стадии выздоровления. |
|